Tinción de Gram

Objetivo: Será reconocer reconocer y distinguir diferentes morfotipos, y saber diferenciar bacterias Gram positivas de Gram negetivas.

Materiales:

- Microscopio
- Mechero de metanol
- Portaobjetos
- Pinzas
- Asa de siembra
- Puente de tinción
- Pipeta desechable
- Aceite de inmersión
- Reactivos; Violeta de Genciana, Fuchsina básica diluida, Solución de lugol y alcohol de 96º

Técnica:

1. Echamos con una pipeta una gota de agua sobre el portaobjetos.
2. Con el asa de siembre cogemos una muestra del microorganismo y la esparcimos sobre la gota.
3. Con las pinchas sujetamos el portaobjetos y le pasamos sobre el mechero unas cuantas veces para fijar bien la muestra al portaobjetos.
4. Colocamos el portaobjetos en el puente de tinción y agregamos unas cuantas gotas de violeta de genciana, esperamos 1 minuto.
5. Retiramos el sobrante con agua y echamos solución de lugol, esperamos 1 minuto.
6. Retiramos el sobrante con agua y echamos durante 30 segundos alcohol de 96º.
7. Echamos por último unas gotas de Fuchsina básica diluida y esperamos 3 minutos.
8. Lavamos el sobrante con agua y secamos el portaobjetos al aire o con ayuda del mechero.
9. Por último observaremos la muestra al microscopio con el objetivo de 100x, e identificaremos si son Gram positivos o Gram negativos.